Агрегация родопсина лягушки в олигомеры и их диссоциация до мономера: применение BN- и Ds-Na-ПААГ-электрофорезов^*,**

Аннотация

После солюбилизации ROSs лягушки мягкими детергентами (DIG, DM, CHAPS, TX) и последующего 1Д BN-ПААГ-электрофореза Rh на градиентном геле находится не в виде мономера с M_app ~ 40 кДа, а представлен олигомерным RhA, молекулярная масса которого варьировала в разных детергентах в пределах 85–125 кДа. Двухчасовая обработка RhA в геле денатурирующей смесью (10%-ный DS-Na + 1 mM ДTT), за которой следовал 2Д Ds-Na-ПААГ-электрофорез, приводили к диссоциации RhA на опсин – мономер с M_app ~40 кДа и неидентифицированные белки. Двухдневная обработка RhA, включавшая в себя его экстракцию из геля, концентрирование и разделение с помощью 1Д Ds-Na-ПААГ, вызывала наряду с диссоциацией его на опсин-мономер + неидентифицированные белки, образование высших олигомеров за счет вторичной агрегации опсина в жестком детергенте. Cолюбилизации белков ROSs c помощью Ds-Na + ДТТ и последующий 1Д Ds-ПААГ-электрофорез выявили на геле опсин в мономерной форме, а также неидентифицированные белки. Нагревание такого препарата приводило к исчезновению опсина-мономера и образованию из него высших олигомеров. Полученнные данные свидетельствуют, что степень олигомеризации Rh зависит от специфических условий микроокружения, в котором он находится. В мембране дисков, так же как и после солюбилизации мягкими детергентами, Rh лягушки находится в состоянии димера и высших олигомеров. После солюбилизации денатурирующими детергентами агрегат диссоциирует до мономера, который затем опять может самоассоциироваться в высшие олигомеры под влиянием различных воздействий (например, нагревания).

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: