Новая функция аминогруппы тиаминдифосфата в тиаминовом катализе^*

Аннотация

Исследованы скорость образования и стабильность центрального интермедиата транскетолазной реакции с использованием в качестве кофермента тиаминдифосфата (TDP) и 4′-метиламиноTDP методами stopped-flow-спектрофотометрии и кругового дихроизма (КД). Методом ЯМР проанализированы интермедиаты транскетолазной реакции. Показано, что целостность аминогруппы кофермента влияет на кинетическую стабильность центрального интермедиата транскетолазной реакции, α-карбанион/енамина диоксиэтил-TDP. Установлено, что скорость его образования в случае нативного и метилированного TDP была одинаковой, а скорость протонирования или окисления в феррицианидной реакции была намного выше в комплексе с аналогом. В процессе односубстратной реакции в спектре КД комплекса транскетолаза–4′-метил-аминоTDP зарегистрирована новая отрицательная полоса, характеризующая выход протонированного диоксиэтил-4′-метиламиноTDP из активных центров фермента. Приведенные данные свидетельствуют о том, что транскетолаза в комплексе с метилированным по аминогруппе TDP характеризуется диоксиэтил-4′-метиламиноTDP-синтазной активностью. Таким образом, 4′-аминогруппа кофермента обеспечивает кинетическую стабильность центрального интермедиата транскетолазной реакции, диоксиэтилTDP.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: