БИОХИМИЯ, 2009, том 74, вып. 2, с. 272–277

УДК 577.218

Гиперэкспрессия в Escherichia coli и очистка рекомбинантного основного фактора роста фибробластов человека (FGF-2)

© 2009 М.Э. Гаспарян 1*, П.А. Елистратов 1, Н.И. Дризе 2, И.Н. Нифонтова 2, Д.А. Долгих 1, М.П. Кирпичников 1

1 Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

2 Гематологический научный центр РАМН

Поступила в редакцию 17.04.2008
После доработки 26.05.2008

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: основной фактор роста фибробластов, рекомбинантный белок, E. coli.

Аннотация

Основной фактор роста фибробластов (FGF-2) является одним из членов большого семейства структурно похожих белков, которые влияют на рост, дифференцировку, миграцию и выживание множества типов клеток. Ген FGF-2 человека (кодирующий остатки 1–155) был синтезирован с помощью ПЦР из 20 олигонуклеотидов и клонирован в вектор pET-32a. Высокий уровень экспрессии (1 г/л) слитного белка Trx/FGF-2 был достигнут в штамме Escherichia coli BL21(DE3). Слитный белок был очищен из растворимой фракции цитоплазматических белков на колонке с Ni-NTA-агарозой. После расщепления слитного белка Trx/FGF-2 рекомбинантной легкой цепью энтеропептидазы FGF-2 был очищен от тиоредоксина на гепарин-Cефарозе. Выход высокоактивного FGF-2 без N- и C-концевых тагов составил 100 мг из 1 л культуры клеток. Введение точечных мутаций C78S и C96S снизило образование димерных молекул в препарате FGF-2, не влияя на его растворимость и активность.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.