Зависимость конформации D3/D4 доменов CD4 человека от его гликозилирования и прикрепления к мембране

Аннотация

C использованием моноклонального антитела (МКА) Т6 исследована конформационная динамика рецепторного белка CD4 хэлперных Т-клеток человека. Это антитело различает s- и m-формы рецептора, узнавая специфическую конформацию, присутствующую в sCD4, содержащем первые девять аминокислот трансмембранной последовательности молекулы. Однако замена Trp на Ser в положении 2 в этой последовательности дестабилизирует конформацию Т6-типа. При помощи ферментативного дегликозилирования и мутантных делеций сайтов гликозилирования показано, что конформация Т6-типа зависит от гликозилирования в обоих сайтах (Asn-271 и Asn-300). Установлено также, что сахара не участвуют в прямом связывании с антителом, но стабилизируют локальную конформацию доменов D3/D4. Дегликозилированные формы sCD4 in vivo приобретают специфическую конформацию, подобную конформации sCD4 дикого типа, которая, однако, не может восстановиться после денатурации/ренатурации в условиях «нередуцирующего» Вестерн-блота. Полученные данные указывают на то, что правильный белковый фолдинг нуждается в участии шаперонов и не может произойти in vitro. Полностью негликозилированный sCD4 синтезируется клетками и секретируется в ростовую среду. Показано, что в среде этот мутантный белок нестабилен и агрегирует в процессе инкубации. В отличие от растворимой формы, мутации в сайтах гликозилирования приводят к прекращению экспрессии мембранной формы CD4, что указывает на различные пути секреции растворимого и мембранного белка.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: